Screening and Validation of Aquaporin Inhibitors for Cancer Therapeutics

Aquaporins (AQPs) are transmembrane proteins that facilitate the diffusion of water and glycerol across cell membranes, crucial for water and energy homeostasis. These proteins were found overexpressed in different cancer cells and tissues, being involved in tumor formation, cell proliferation and migration, suggesting their great potential as drug targets for cancer treatment. Identification of novel aquaporin modulators to be used in cancer therapeutics is of utmost importance. In this study, the inhibitory effect of polyoxometalates, vanadium, copper, zinc and gold-based compounds was screened by the stopped-flow technique in human red blood cells (RBCs) and then validated in aquaporin-expressing yeast cells. From the set of polyoxometalates, polyoxotungstate-A (POT-A) revealed as the most promising AQP3 inhibitor with an IC50 of (0.71 ± 0.04) μM. Using yeast cells individually expressing human aquaporins, POT-A showed to selectively inhibit AQP3 with 100% inhibition, corroborating the results of RBCs assays. The vanadium compound P103, showed highly inhibition of AQP1 with an IC50 of (9.11 ± 0.03) μM in RBCs. The gold-based compound RBA29 revealed as a promising AQP3 inhibitor with an IC50 of (2.29 ± 0.03) μM in RBCs. Moreover, compounds RBA29, RBA31 and STAM013 showed an inhibitory effect in AQP9-tranformed yeasts, with an IC50 of (6.64 ± 0.09) μM for RBA29. In addition, investigation of the channel residues important for AQP5 permeability revealed a new gating mechanism where His73 located in the selectivity filter interacts with phosphorylated Ser183, conducting to the pore constriction. Furthermore, the activity of aquaporins from diverse organisms was evaluated, wherein aquaporin from tardigrade revealed to be water selective and exhibited higher water permeability than the other aquaporins tested. Overall, these data contribute to the discovery and design of selective inhibitors with potential therapeutic application

Assembly and function of a protein cross-linking enzyme during bacterial spore morphogenesis

Sporulation in Bacillus subtilis culminates with the formation of a dormant endospore. The endospore (or spore) is one of the most resilient cell types known and can remain viable in the environment for extended periods of time. Contributing to the spore’s resistance and its ability to interact with and monitor its immediate environment is the coat, the outermost layer of B. subtilis spores. The coat is composed by over 70 different proteins, which are produced at different stages in sporulation and orderly assembled around the developing spore.(...)Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT

Capacidade funcional e bomba muscular venosa na doença venosa crónica

Objetivos – Avaliar a capacidade funcional e a função da Bomba Muscular Venosa em sujeitos com Doença Venosa Crónica (DVC) e em saudáveis. Relevância – Os utentes com DVC têm diminuição da qualidade de vida relacionada com a saúde e alterações funcionais dos membros inferiores sendo importante avaliar e intervir nesta área. Amostra – Participaram neste estudo 109 sujeitos (36 saudáveis e 73 com DVC). Material e Métodos – A severidade da DVC foi avaliada através da Venous Clinical Severity Score, a amplitude de movimento ativa (ADMa) da tibiotársica(°) e a força muscular dos flexores plantares (PT, PT/BW, TW, AP) através do Dinamómetro Isocinético Biodex System 3 Pro®, o estado de saúde funcional através do Functional Status Questionnaire, a velocidade da marcha(m/s) através do 10-meter walk test, o equilíbrio ântero-posterior e médio-lateral(cm) através do Functional Reach Test e do Lateral Reach Test, respetivamente. Análise Estatística – Foi utilizada estatística descritiva para descrever a amostra e os resultados obtidos. Aplicou-se estatística inferencial paramétrica (Independent-Samples T Test, One-Way ANOVA, coeficiente de correlação de Pearson) por a amostra apresentar uma distribuição normal (Kolmogorov–Smirnov). O nível de significância foi estabelecido em P<0,05. Resultados – A velocidade da marcha, a força muscular e as dimensões físicas do estado de saúde funcional estão diminuídas no grupo com DVC (P<0,05). A ADMa, a força muscular (PT/BW 60°/s e 120°/s, TW 60°/s e 120°/s e AP 120°/s), a função física 2 e social 1 e 2 diminuem com a severidade da DVC (P<0,05). A função social 1 e todos os parâmetros recolhidos pelo dinamómetro isocinético apresentam-se diminuídos quanto maior for a gravidade da doença (P<0,05). Conclusão – Os sujeitos do grupo com DVC revelaram uma diminuição da força muscular dos flexores plantares, da velocidade da marcha e do estado de saúde funcional (dimensões físicas) em relação ao grupo controlo, as quais tendem a agravar com a severidade da doença

Traços de personalidade estilos de coping e qualidade do sono em estudantes do sexo feminino

Trabalho final de mestrado integrado em Medicina (Psicologia Médica) apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de CoimbraIntrodução: Um sono de boa qualidade é fundamental para o nosso bem-estar e funcionamento diurno. Existem diferenças individuais nos padrões de sono, conhecendo-se ainda pouco sobre os factores que concorrem para essas diferenças, particularmente em jovens do sexo feminino. Objectivo: Explorar a associação entre Traços de Personalidade (Extroversão, Neuroticismo), Estilos de Coping (Reavaliação, Inibição), Afecto (Positivo, Negativo), Activação Cognitiva à noite e o Padrão de Sono (Duração habitual, Profundidade, Qualidade, Necessidade, Flexibilidade, Latência, Acordares nocturnos, Inércia). Metodologia: A amostra incluiu 303 estudantes universitárias (Média de idades, M=18.80 anos, Desvio Padrão, dp=1.13, Variação=17-24) do Mestrado Integrado em Medicina da Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra, que aceitou responder voluntariamente à versão reduzida do Inventário de Personalidade de Eysenck (Eysenck & Eysenck, 1964; Silva, 1994; Barton et al., 1995), ao Questionário de Regulação Emocional (Gross & John, 2003), ao Perfil de Estados de Humor (McNair et al., 1971; Azevedo et al., 1991), a um item sobre Activação Cognitiva à noite e a um Questionário do Sono previamente validado. Resultados: A Extroversão e o Afecto Positivo permitiram explicar uma boa Qualidade de Sono [R2=.023, F(2,264)=3.12, p<.046] e menor duração de Sono Necessário [R2=.04, F(2,263)=5.49, p=.005]. Em contraste, o Neuroticismo, o Afecto Negativo e a Activação Cognitiva à noite contribuíram para pior Qualidade do Sono [R2=.11, F(3,261)=10.91, p<.001], enquanto que Neuroticismo, Inibição e Activação Cognitiva à noite contribuíram para maior duração de Sono Necessário [R2=.08, F(3,268)=7.82, p<.001]. Contrariamente ao 3 que seria esperado os Estilos de Coping não se associaram de forma consistente com as variáveis de Sono. Conclusões: Este estudo permitiu confirmar a importância dos Traços de Personalidade (Extroversão, Neuroticismo), do Afecto (Positivo, Negativo) e da Activação Cognitiva à noite enquanto factores psicológicos a ter em conta no estudo da Qualidade e Necessidade de Sono em estudantes universitárias. 1 Parte deste trabalho foi apresentado no 20th Congress of the European Sleep Research Society . Lisboa, 14-18 de Setembro de 2010 Quintal J, Marques M, Soares MJ, Rosmaninho J, Lopes M, Maia B, Pereira AT, Macedo A, Gomes A, Bos S, Azevedo MH (2010) Neuroticism, coping styles and sleep quality in female students. Journal of Sleep Research, 19 (suppl.2):212.Introduction: A good sleep quality is extremely important for our well being and appropriate function during the day. There are individual differences in sleep patterns, yet the factors that contribute to these differences are still not completely known, particularly in young females. Objective: To explore the association between Personality Traits (Extraversion, Neuroticism), Coping Styles (Reappraisal, Suppression), Affect (Positive, Negative), Cognitive Arousal at bed time and Sleep patterns (Duration, Depth, Quality, Needs, Flexibility, Latency, Nocturnal Awakenings, Inertia). Methods: The sample comprised 303 female students from de Medical Course of the Faculty of Medicine of Coimbra University (Mean age, M=18.80 years, Standard Deviation, sd=1.13, Range=17-24) who voluntarily filled in a short version of the Eysenck Personality Inventory (Eysenck & Eysenck, 1964; Silva, 1994, Barton et al., 1995), the Emotion Regulation Questionnaire (Gross & John, 2003), the Profile of Mood States (McNair et al., 1971; Azevedo et al., 1991), one item about Cognitive Arousal at bedtime and a Sleep Questionnaire previously validated. Results: Extroversion and Positive Affect were predictors for good Sleep Quality [R2=.023, F(2,264)=3.12, p<.046] and less Sleep Needs [R2=.04, F(2,263)=5.49, p=.005]. By contrast, Neuroticism, Negative Affect and Cognitive Arousal at bedtime predicted poor Sleep Quality [R2=.11, F(3,261)=10.91, p<.001], while Neuroticism, Inhibition and Cognitive Arousal at bedtime were predictors for increased Sleep Needs [R2=.08, F(3,268)=7.82, p<.001]. Contrary to expected Coping Styles were not consistently associated with Sleep variables. 5 Conclusions: Results from the current study confirm that Personality Traits (Extroversion, Neuroticism), Affect (Positive, Negative) and Cognitive Arousal at bedtime are important psychological factors to be considered when exploring Sleep Quality and Sleep Needs in female university students. 1 Presented in part at the 20th Congress of the European Sleep Research Society . Lisboa, 14-18 de Setembro de 2010 Quintal J, Marques M, Soares MJ, Rosmaninho J, Lopes M, Maia B, Pereira AT, Macedo A, Gomes A, Bos S, Azevedo MH (2010) Neuroticism, coping styles and sleep quality in female students. Journal of Sleep Research, 19 (suppl.2):212

NGS Panels applied to Hereditary Cancer Syndromes

Cancer is among the leading causes of morbidity and mortality worldwide (Okur et al, 2017). Germline pathogenic variants for monogenic, highly penetrant cancer susceptibility genes are observed in 5%–10% of all cancers (Lu et al, 2014). Hereditary cancers due to monogenic causes are characterized by earlier age of onset, other associated cancers, and often a family history of specific cancers. From the clinical perspective, it is important to recognize the affected individuals to provide them the best clinical management (Hennessy et al, 2010; Ledermann et al, 2014; Pennington et al, 2014) and to identify at-risk family members who will benefit from predictive genetic testing and enhanced surveillance, including early detection and/or risk reduction measures (Kurian et al, 2010; Okur et al, 2017). Germline variants identified in major cancer susceptibility genes associated with hereditary breast or ovarian cancer (HBOC) or hereditary colorectal cancer (HCRC), also account for 5-10% of the patients with these cancers. In the last years, new susceptibility genes, with different penetrance degrees, have been identified. Variants in any of those genes are rare and classical methodologies (e.g. Sanger sequencing - SS) are time consuming and expensive. Next-generation sequencing (NGS) has several advantages compared to SS, including the simultaneous analysis of many samples and sequencing of a large set of genes, higher sensitivity (down to 1% vs 15-20% in SS), lower cost and faster turnaround time, reasons that make NGS the best approach for molecular diagnosis. It is possible nowadays to choose between whole-genome sequencing (WGS), whole-exome sequencing (WES) and NGS limited to a set of genes (NGS-Panel). In cases where a suspected genetic disease or condition has been identified, targeted sequencing of specific genes or genomic regions is preferred (Grada et al, 2013). For that reason, we use NGS-Panel approach using TruSight Cancer (Illumina) to sequence DNA extracted from blood samples of patients with personal and/or familiar history of cancer. This hereditary cancer gene panel sequences 94 genes associated with both common (e.g., breast, colorectal) and rare hereditary cancers and allows the creation of virtual gene panels according to each phenotype or disease under study. NGS workflow analysis (Figure 1) includes five steps: quality assessment of raw data, read alignment to a reference genome, variant identification/calling, variant annotation and data visualization (Pabinger et al, 2013). The establishment of the most appropriate bioinformatics pipeline is crucial in order to achieve the best results. NGS data allows the identification of several types of variants like single nucleotide variants (SNVs), small insertions/deletions, inversions and also copy number variants (CNVs).FCT - UID/BIM/0009/2016info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Preferências dos Idosos em Relação ao Feedback dos Instrutores, em Aulas de Grupo de Hidroginástica

Dissertação apresentada para a obtenção de Grau de Mestre em Atividade Física em Populações Especiais conferido pela Escola Superior de Desporto de Rio Maior – Instituto Politécnico de SantarémO presente estudo tem como objetivo caracterizar as preferências de praticantes idosos, no que diz respeito à frequência dos vários tipos de feedback dos instrutores, nas sessões de hidroginástica. A amostra foi constituída por 218 idosos, praticantes de hidroginástica. Foi utilizado o questionário denominado, Questionário de Feedback de Instrutores de Fitness – Aulas de Grupo (QUEFIF – AG), na versão preferências dos praticantes. O questionário era constituído por 45 questões, sendo que cada questão corresponde a um tipo de comportamento de feedback. Os resultados mostraram quais os tipos de comportamento mais e menos preferidos, dos praticantes. Os praticantes preferem que o instrutor informe como se deve realizar o exercício, através da forma verbal para que estes possam ouvir as informações dadas. Durante a realização dos exercícios, os praticantes preferem que o instrutor realize os mesmos exercícios e que este se encontre próximo, ou seja, a uma distância que seja possível existir contacto físico. O instrutor quando emite feedback deve mostrar afetividade positiva, ou seja, rir, ou manter qualquer tipo de contacto positivo com os seus praticantes. Quando este emite feedback deve-se dirigir a toda a classe e em relação a um exercício de cada vez, pois torna-se mais fácil assimilar as informações dadas. O feedback emitido deve ser dado imediatamente após a realização do exercício fazendo referência à forma como os praticantes devem respirar, na execução dos exercícios. O instrutor deve orientar-se de frente para os praticantes e emitir feedback ficando a observar os praticantes e emitir um novo feedback.The aim of the present study was to characterize the elderly participants preferences about instructors’ feedback behaviour in Aquafitness classes. The sample was 218 elderly participants of Aquafitness classes. An instructors’ feedback behaviors questionnaire (QUEFIF-AG) was used, in participants preferences version. The questionnaire has 45 questions and each question corresponded to a type of feedback behavior. The results showed which types of behavior are more and less preferred, of the participants. Participants prefer that the instructor inform how they perform the exercise, through the verbal form so they can hear the information given. During an exercise, participants prefer that the instructor perform the same exercises and that the instructor is close, that is, at a distance that it is possible to exist physical contact. The instructor should show positive affectivity, that is, laugh or maintain any type of physical contact with its participants. When you send feedback should be directed to the whole class and in relation to one exercise at a time, as it becomes easier to assimilate the information given. The feedback issued must be given immediately after the exercise and the instructor should give more importance to how participants should breathe, in the execution of the exercises. The instructor should be facing the participants and choose to issue feedback, stay watching the participants and issue new feedback.N/

Assessing gut precursors asymmetric cell behaviours in the zebrafish embryo

Tese de mestrado em Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, em 2018Externamente, o corpo dos vertebrados é simétrico bilateralmente, no entanto, órgãos como o coração, intestino, pâncreas e fígado, pulmões e a vasculatura apresentam uma assimetria relativamente ao eixo Esquerda-Direita (ED), no que diz respeito ao seu posicionamento e/ou morfologia, numa disposição conservada denominada de situs solitus. O estabelecimento do eixo ED ocorre durante a embriogénese num processo coordenado após o estabelecimento dos eixos Antero-Posterior (AP) e Dorso-Ventral (DV). Quando ocorrem anomalias durante o estabelecimento do eixo ED, vários quadros clínicos afetando a posição e morfologia destes órgãos podem surgir. Tais casos incluem situs inversus, que corresponde a uma completa inversão na disposição dos mesmos, ou heterotaxia, um espectro descrito por vários possíveis desarranjos no posicionamento, em que alguns órgãos podem apresentar normal assimetria ED e outros não. Nos vertebrados, a assimetria é estabelecida com a expressão assimétrica de Nodal, uma proteína da família TGFb, do lado esquerdo da placa mesodérmica lateral (PML). O conhecimento atual demonstra que esta quebra na simetria, na maioria dos vertebrados, ocorre numa estrutura chamada de organizador ED, dotada de cílios móveis que promovem um fluxo assimétrico do fluido que enche esta cavidade, impulsando a quebra da simetria. No peixe-zebra, este organizador é a vesícula de Kupffer (KV), formada a partir de um grupo de células localizadas numa zona adjacente ao escudo embrionário, as dorsal forerunner cells. Durante o processo de formação, esta estrutura sofre vários rearranjos, apresentando no final uma distribuição dos cílios assimétrica, com uma maior densidade na região antero-dorsal. Esta arquitetura produz um fluxo no sentido anti-horário que promove o aumento de Ca2+ intracelular nas células mais à esquerda na KV, via mecanismos envolvendo o complexo Pkd1l1-Pkd2 e a CaMK-II. Em peixe zebra há três ligandos Nodal, Cyclops, Squint e Southpaw. Southpaw (Spaw) é o ligando Nodal envolvido na quebra e transmissão de assimetria ED no peixe-zebra. A expressão de southpaw (spaw) apresenta uma forma bilateralmente simétrica em torno da KV aos 4-6 sómitos (ss). Por volta dos 10-12 ss, a expressão de spaw torna-se assimétrica na PML do lado esquerdo. Pensa-se que Dand5, uma proteína da família DAN, possa estar ativamente envolvida na formação da assimetria de spaw na PML. Aos 8 ss, dand5 apresenta uma expressão assimétrica, dependente do fluxo, mais forte do lado direito, sendo o primeiro gene assimétrico na KV. Como antagonista de Spaw, Dand5 liga-se a Spaw alegadamente mais no lado direito da KV, postulando-se que promove assim que Spaw difunda da região perto da KV em direção ao lado esquerdo da PML para lá estimular a expressão de spaw mRNA. Através de um feedback positivo, a sua expressão é amplificada na PML até aos 22 ss. Spaw também estimula a expressão de pitx2 no lado esquerdo da PML por volta dos 13 ss, e embora a sua expressão seja dependente da sinalização Nodal, em peixe zebra foi demonstrado que Pitx2 não é necessário para normal lateralização do coração e órgãos digestivos como no ratinho e outros vertebrados. Foi então sugerido que um outro gene, elovl6, expresso também no lado esquerdo da PML poderá estar envolvido no estabelecimento da assimetria dos referidos órgãos em peixe zebra. Adicionalmente, Spaw também vai levar à ativação dos seus próprios reguladores negativos, os genes lefty1 e lefty2, ficando estes restringidos à linha mediana e lado esquerdo do campo do coração, respetivamente. Adicionalmente à mesoderme, o ligando Nodal também afeta o processo de especificação e desenvolvimento da endoderme. Este envolve uma complexa e sucessiva interação de vias de sinalização e fatores de transcrição. A endoderme sofre complexos processos morfogenéticos, primeiro após a gastrulação, converge em torno da linha mediana cobrindo todo o eixo AP. O primórdio do tubo digestivo é formado pelo rearranjo das células precursoras, que polarizam e formam um lúmen por volta das 20 horas pós-fertilização (hpf) que se estende até às 42 hpf. Este tubo dará origem aos órgãos como o fígado, pâncreas e bexiga natatória. Um processo, chamado de looping do tubo digestivo, ocorre entre 26-30 hpf, no qual porções do mesmo são deslocadas da linha mediana para a esquerda da mesma. A PML foi envolvida neste processo devido às suas assimetrias migratórias que impõem o deslocamento da endoderme. O primeiro primórdio pancreático emerge também por volta das 24 hpf, o primórdio dorsal, que dará apenas origem ao tecido endócrino. O segundo primórdio, aparece bastante mais tarde, por volta das 40 hpf, o primórdio ventral que dá origem tanto a tecido endócrino como exócrino, assim como os ductos pancreáticos. O primórdio do fígado emerge entre as 24 e 28 hpf, estendendo-se da linha axial para a esquerda sobre o saco vitelínico. Tendo em conta que Nodal afeta a taxa de migração das células, nomeadamente as da endoderme e que a expressão assimétrica de dand5 muito provavelmente é responsável pela expressão assimétrica de spaw nas células da PML, neste projeto de tese, propusemos que as células migratórias da endoderme e precursoras do tubo digestivo possam ser afetadas pela sinalização Nodal (Spaw). Consequentemente, estas células podem migrar mais rápido no lado esquerdo que no lado direito, onde Spaw é supostamente inibido por Dand5. Sabendo que estas células apresentam um comportamento migratório antes da difusão da expressão assimétrica de spaw e elovl6, propomos um papel ativo para estas células. Sugerimos testar se os sinais ED, imediatamente após a quebra da simetria na KV podem afetar a padronização ED das células migratórias da endoderme. Também propomos a hipótese destas células integrarem o tubo digestivo, em formação durante estes estadios, e poderem contribuir para a formação dos órgãos assimétricos como o fígado e pâncreas. Assim, o nosso objetivo secundário, foi estudar o destino destas células da endoderme com comportamento migratório. Utilizando uma linha repórter Tg(sox17:GFP), procedemos ao estudo do comportamento migratório das células endodérmicas com captação de imagens ao vivo e análise paralela de embriões fixados. Sox17 é um marcador da endoderme permitindo visualizar as células que queremos estudar assim como a KV, o tubo digestivo e órgãos derivados do mesmo. Reportamos então neste estudo a formação de um agregado de células sox17:GFP+, não reportado anteriormente, o qual chamámos de ‘cluster’, localizado numa região posterior à KV aos 10 ss. Observámos que é a partir deste agregado que as células sox17:GFP+ começam a migrar em direção ao lado anterior do embrião aquando da passagem da KV sobre o mesmo devido ao crescimento da cauda. Este resultado levanta a questão de porque é que estas células formam este agregado posterior e não se intercalam formando o tubo digestivo como as outras sox17:GFP+. Os estudos de captação de imagens ao vivo não produziram resultados com diferenças significativas entre a ED. A falta de significância estatística foi justificada pelo tamanho sub-ótimo da amostra. Por outro lado, os estudos com embriões fixados, foram robustos em número de embriões e permitiram uma resolução excelente em profundidade. Observámos assim diferenças significativas entre ED, nomeadamente no número de células migratórias, maior no lado esquerdo aos 13 e 14 ss, assim como denotamos uma maior dispersão e distância à KV aos 14 ss. Para averiguar o destino destas células de posicionamento assimétrico, realizámos um estudo com Kaede, uma proteína fotoconvertível por UV, pelo que fotoconvertemos as células do agregado a 8ss bem como os dois grupos de células migratórias de cada lado da KV a 14 ss. No entanto, após varias tentativas os resultados obtidos não nos permitiram concluir se as células alvo incorporam o tubo digestivo. Pensamos que a proliferação celular dilui a Kaede fotoconvertida, não permitindo esta observação. Em conclusão, conseguimos caracterizar o padrão de migração das células sox17:GFP+, tendo sido observadas algumas assimetrias ED em análises temporais. Desta forma, este trabalho valida a nossa hipótese inicial em que a migração das células endodérmicas seria afetada assimetricamente em relação ao eixo ED. Propomos então um mecanismo alternativo no qual sinais ED assimétricos, ocorrentes nas células da KV podem estar a afetar o comportamento migratório da endoderme. Para tal, o próximo passo é a manipulação destes sinais assimétricos para testar se o comportamento das células sox17:GFP+ observado é alterado. Também sugerimos a continuação de estudos complementares de captação de imagens ao vivo com vista a determinar o destino das células alvo.The establishment of the left-right (LR) axis is fundamental for the correct position of visceral organs. In vertebrates, asymmetry is established with the expression of nodal, southpaw (spaw) in zebrafish, only in the left Lateral Plate Mesoderm (LPM). Current knowledge shows that in most vertebrates the symmetry breaking event occurs in a specialized structure called the LR organizer (LRO), where biophysical interactions determine the first asymmetric clues. In zebrafish, the LRO is called Kupffer’s vesicle (KV), a transient fluid-filled, monociliated organ, which appears during the early segmentation period at the posterior end of the notochord. In zebrafish, spaw expression is bilaterally symmetric in the cells surrounding the KV at 4-6 ss becoming asymmetrical in the left LPM around 10–12 ss. Motile cilia inside the KV ensure a counter-clockwise fluid flow that is important to establish the first asymmetric gene expression of dand5 at 8 ss. Dand5 is a secreted protein shown to be a potent Nodal inhibitor. The exclusive left sided southpaw (spaw) expression at the lateral plate mesoderm is thought to be the result of the earlier Dand5-Spaw inhibition near the KV. Previous data have shown a possible migration of endodermal gut precursor cells very close to the KV and other studies have demonstrated that Nodal affects cell migratory speed, namely in endodermal cells. So, we hypothesized that endodermal cells on the left side of the KV being exposed to more Spaw will migrate faster than the ones on the right side where Spaw is inhibited by Dand5. To characterize the migratory behaviour of these gut precursor cells we used the Tg(sox17:GFP) reporter line using two photon live-imaging as well as complementary time-course fixed samples. We observed that endodermal cells form a cluster at the posterior midline that is disassembled by cell migration triggered by the KV passing over it. Additionally, even though live studies did not show significant differences in measurements such as migration speed and track displacement, perhaps due to our small sample size, differences in the pattern of cell migration on the Left versus Right sides were observed in fixed embryos. These included differences in several parameters, such as the number of cells, distance to KV centroid, distance between cells. To understand if the migratory sox17:GFP+ cells were indeed incorporating the gut tube and where, we performed photoconversion experiments using Kaede. However, the results did not allow us to take such conclusions, mainly due to the fact that cell proliferation dilutes photoconverted Kaede. Still, in this study we showed that there is asymmetric positioning of migratory endodermal cells in a LR manner. We thus propose an alternative mechanism in which LR asymmetric cues that take place in the KV cells can affect endodermal migratory behaviours. Therefore, the next step will be to manipulate LR signals within the KV in order to test if the observed asymmetries are indeed originated from R>L dand5 asymmetric expression. We also suggest performing more live imaging studies in order to determine the fate of the migratory endodermal cells